植物體內(nèi)蛋白質(zhì)氮測(cè)定的原理和步驟
植物體內(nèi)的氮化物可分為蛋白質(zhì)氮和非蛋白質(zhì)氮兩大類(lèi)。二者的含量和比例，隨著植物的生理狀況及環(huán)境條件的不同而發(fā)生變化。所以，測(cè)定兩類(lèi)氮化物含量的變化動(dòng)態(tài)，對(duì)研究植物在不同情況下，氮素的吸收、運(yùn)轉(zhuǎn)和代謝規(guī)律，以及確定農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值等具有一定意義。
一、測(cè)定原理
在進(jìn)行氮化物系統(tǒng)測(cè)定時(shí)，首先要將各類(lèi)氮化物進(jìn)行分離，分別消化，將非氨態(tài)氮轉(zhuǎn)變?yōu)榘睉B(tài)氮。然后，用測(cè)氨態(tài)氮的方法進(jìn)行測(cè)定。
1.分離：用三氯乙酸浸提樣品時(shí)，蛋白質(zhì)沉淀析出，而非蛋白質(zhì)則熔解在三氯乙酸中，然后分別測(cè)定沉淀物及濾液中的氮量，即可求出蛋白氮和非蛋白氮的含量�！�
2.消化：當(dāng)植物材料與濃硫酸一起加熱時(shí)，硫酸分解成為二氧化硫、水和原子態(tài)氧，將有機(jī)物氧化分解生成二氧化碳和水。反應(yīng)為：
為了加速消化進(jìn)程，加入硫酸鉀及還原性催化劑硫酸銅。硫酸鉀可大大提高氧化能力及增高硫酸的沸點(diǎn)。
二、測(cè)定步驟
1.分離提�。孩僭诜治鲐渤由蠝�(zhǔn)確稱(chēng)取磨碎過(guò)篩的風(fēng)干樣品0.1~0.5克(視含氮量而定)，放入100毫升帶塞磨口三角瓶中，加20毫升吞萬(wàn)的三氯乙酸，置振蕩機(jī)上振蕩提取一小時(shí)。然后用漏斗過(guò)濾，濾液直接漁入克氏瓶中，用三氯乙酸將三角瓶中樣品沖洗數(shù)次，每次用量10毫升，把樣品殘?jiān)恳迫肼┒分校瑸V液全部濾入克氏瓶?jī)?nèi)(沖洗液最不要過(guò)多)。②將瓶?jī)?nèi)的濾液濃縮至3、5毫升，用以測(cè)定非蛋白氮.再將漏斗中沉淀連同濾紙一道放入另1個(gè)克氏瓶中，用以測(cè)定蛋白氮，并取同樣重量的嫩紙一張，放在第三個(gè)克氏瓶中，作空白測(cè)定。
2.消化：①向以上樣品及空白測(cè)定的克氏瓶中各加入濃硫酸3、6毫升，混合催化劑0.3、0.5克(如用比色法測(cè)定氮，消化時(shí)不必加催化劑，而用幼萬(wàn)的過(guò)氧化氫促進(jìn)載化)。加好后，蓋上小漏斗，浸泡樣品數(shù)小時(shí)或1夜。這樣，可以減少泡沫，防止外溢。②開(kāi)始消化時(shí)火焰宜小，待有二氧化硫氣體出現(xiàn)后，逐漸升溫，使內(nèi)容物達(dá)到曦沸。在消化過(guò)程中，瓶巾的顏色將發(fā)生以下的變化。黑、深棕一淺棕一黃一綠，藍(lán)綠在消化過(guò)程中，須經(jīng)常轉(zhuǎn)動(dòng)克氏瓶。當(dāng)溶液變成淺棕色時(shí)，如果瓶璧還附有黑色傾拉時(shí)，可以將瓶適當(dāng)揭動(dòng)使黑粒洗下。繼續(xù)加熱。至溶液呈清亮的藍(lán)色后，再加熱10分鐘俏化完畢。此時(shí)樣品中的蛋白氮和非蛋白氮化物全部轉(zhuǎn)變?yōu)榘睉B(tài)氮。③待瓶冷卻后，向其中加10毫升蒸餾水，搖勻，并小心倒入10D毫升容量瓶中。再以少最燕餾水稀釋至刻度，混勻備用。
3.氮的測(cè)定：氮的測(cè)定可用KDN系列定氮儀法，也可以用次鹵酸氧化法成其它比色法。
